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Techniques d’Observation.

Plancton d'automne : Aventures microscopiques Episode 3

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Il y a 6 ans j’écrivais un article sur l’épisode II de ces aventures en milieu urbain ( ICI )
concernant ce que l’on pouvait trouver à l’automne sur les bords d’un petit ruisseau côtier Languedocien.
Par suite d’une erreur géographique, j’ai désigné le ruisseau comme étant le Lez alors qu’en fait il s’agit de la
Mosson, tous deux encadrant l’agglomération de Montpellier.
Le temps s’est écoulé avec plus ou moins de bonheur et l’eau aussi dans le ruisseau, dont le
biotope n’a pas changé, mis à part un hiver 2011 exceptionnellement froid. Voici donc que cette
année je refais le prélèvement au même endroit, même époque, et quasiment même météo.
On constate de nombreuses différences ! Sauf remarques particulières les observations sont
faites avec un microscope Wild M20, éclairage LED 1 watt, prise de vue par appareil Pentax 12
mégapixels derrière oculaire grand champ.

  • Mots-Clés : hydres, floscularia, difflugia, pediastrum, scenedesmus, closterium, pleodorina, arcella
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Contraste de Diffaction (CD)

CD

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Qui n’a jamais rêvé d’un beau microscope à contraste interférentiel ? Ou simplement
contraste de phase ?
Oui ! Ca coute cher. Votre porte-monnaie n’est pas assez épais pour vous en payer
un ? Ou alors vous aimez tout simplement bricoler. Cet article est fait pour vous.
Bon, bien sur je ne vais pas vous faire fabriquer un microscope à contraste
interférentiel, ni même à contraste de phase. Mais il existe un autre système : Le contraste de
diffraction.
C’est une technique mise au point par un microscopiste Allemand : Erhard Mathias
Cette technique à l’avantage d’offrir une forte amélioration de contraste tout en étant
relativement simple à fabriquer.

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Mesure directe des objets au microscope.

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Il vous est surement déjà arrivé de vouloir mesurer au microscope des objets que vous avez observé. La mesure se fait généralement à l’aide d’un réticule et d’un micromètre. Ces deux objets sont difficiles à se procurer dans le commerce et chers (vous pouvez fabriquer un micromètre, mais pour ma part je n’ai jamais réussi). Leur utilisation elle-même est compliquée (quoi que très fiable et d’une grande précision). Mais en microscopies amateur, nous n’avons ni les moyens de nous offrir une telle précision, ni le besoin. Une précision de 95% serra toujours très utilisable (et 5% d’erreur dans le domaine des mesures, ce n’est presque rien).

J’ajouterais en dernier argument que ma méthode ne demande qu’un simple double décimètre (moins de 1€ en supermarché) et votre tête (dont vous devez toujours disposer en microscopie). Pour les moins doués (…) je conseillerais une feuille de papier (pour les calculs) et pour les encore moins doués, prenez une calculatrice (non, je rigole, moi aussi j’en ais une).

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Notes techniques pour la récolte et l'étude des Rotifères et autres micro invertébrés aquatiques .

3r - Tete de Philodina avec yeux - Ch. Krebbs

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INTRODUCTION
Cet article était programmé comme la troisième partie (Notes Techniques) pour la Clé des genres des rotifères Bdelloidea déjà publiée.
Une fois écrite je me suis rendu compte que tant la description des micro habitats, que les techniques à utiliser pouvait même être appliquées presque sans modification non seulement aux Bdelloidea mais à beaucoup d’autres groupes de micro invertébrés.
– gastrotriches, nématodes, rotifères monogononta ,
– aux habitants du meiobenthos en incluant les kinorhynches,
– et avec peu de modifications que sûrement l’imagination des amateurs découvrira rapidement, aux entomostracés et les hydracariens.
Par conséquent j’ai modifié le titre pour qu’il devienne plus accessible dans l’indexation d’Internet, bien que j’aie maintenu le texte sans changement.
Mon objectif primaire est encore d’aider à stimuler davantage de travail amateur sur les bdelloidés.

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Contraste de Phase et + (Un condenseur pour CP universel)

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Le microscopiste amateur n’a pas toujours le loisir de pouvoir s’offrir de superbes microscopes équipés en contraste de phase, fond noir et autre modulateurs pupillaires. Quelques récupérations ou achats à bon compte peuvent toutefois compléter un équipement au départ modeste et le bricolage vient à point à qui veut bien se donner la peine de réfléchir un peu.

Ayant acquis dernièrement un superbe x 100 contraste de phase pour équiper mon vieux Labophot, je me suis retrouvé un peu frustré de ne pouvoir l’utiliser faute d’anneau de phase compatible dans mon condenseur. Un ancien condenseur fond noir à sec de chez Reichert est alors venu à mon secours.

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La tige de Monocotylédone

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Résumé : Bien sûr i il y a sur le Réseau beaucoup de pages consacrées à ce sujet. Beaucoup d’entre elles sont richement illustrées d’excellentes photos de préparations microscopiques effectuées en appliquant toutes les règles de l’art : coupes au microtome professionnel après inclusion à la paraffine, probablement à moins de 10 microns d’épaisseur, coloration avec des colorants différentiels pour les différents tissus, etc.

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MICROSCOPES, FILTRES, DIAPHRAGMES ET OBTURATEURS : Détails techniques pour Hommage à la pelure d’oignon.

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ÉQUIPEMENT– Toutes mes images ont été recueillies avec un microscope National Optical DC3-163P, et une camera digitale DC•3 intégré, la balance des blancs est automatique, et les prises de vue contrôlées par un logiciel de capture propriétaire. Le microscope est équipé avec des objectifs DIN plan achromatiques 4x (ON 0.10), 10x (0.25), 40 x (0.65) et 100x IO (1.25), un condensateur ° dAbbé 0N 1.25 et une lampe de 12V, 20W incluse dans le pied, donnant l’éclairage critique. D’autres détails sur l’instrument, la camera, et le logiciel, peuvent être consultés sur ce site:

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Hommage à une pelure d'oignon (L'article)

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Extrait :  » C’ était au temps où le printemps restait figé en moi, car le printemps n’était pas une période de l’année mais un état de mon âme.
C ‘était aussi le temps des moments d’émerveillement découverts dans les feuilles jaunies du livre de Biologie de la bibliothèque municipale.

C’est là que résidaient les cellules d’oignon à l’architecture hexagonale avec des cercles hachurés en guise de noyaux , et celles d’Elodea canadensis, aux petits ronds représentant les chloroplastes. Mais il y avait bien plus encore, le schéma de la cellule rectangulaire des poil staminaux de la Tradescantia avec la forme grisée des ponts du cytoplasme et des petites flèches indiquant le sens du courant de la cyclose.
Mais que pouvaient donc être des poils staminaux ?
Et une Tradescantia ?

Pour voir la cyclose  parcourir   lentement et régulièrement  les fines  lignes transparentes  du cytoplasme a travers la cellule de la Tradescantia  il fallu  presque 20 années supplémentaires de vie au jeune que j’étais alors. »

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Hommage à une pelure d'oignon (La galerie)

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Extrait :  »

Voici un choix d’images prises avec un microscope d’amateur en utilisant différentes méthodes développées l’année dernière par d’autres amateurs.

Nous pouvons donc vous montrer les résultats magnifique issus de trois méthodes professionnelles dont deux d’entre elles nous sont révélées grâce à la bonté de deux amis amateur très avancés.

Il est très important pour moi de vous préciser (comme beaucoup d’entre vous l’ont sûrement déjà constaté ) que les résultats en vision microscopique directe des dispositifs que j’utilise ici et ceux dont je parle dans un article a venir, sont beaucoup plus intenses, et donnent un sentiment de profondeur et de couleur qui ne sont pas fidèlement rendus par les capteurs d’images.
Les filtres de Rheinberg donnent par exemple avec mon microscope beaucoup plus de nuances et de contrastes que ma caméra est capable d’enregistrer.

Exceptés les diaphragmes de champ, utilisés en fond clair au-dessus de la lentille frontale de la lampe afin d’obtenir l’éclairage critique pour chaque objectif, tous les autres filtres, diaphragmes, et disques opaques sont placés dans le porte filtres du condenseur.
Deux de mes exemples ont été pris en fond clair et ont subi un traitement électronique d’image et une post-coloration sous PhotoPaint. »

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Hommage à une pelure d'oignon (Supplément)

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Extrait :  »

Steve Durr

Je vous présente ici l’aimable contribution de Steve Durr à cet article. Steve Durr est un photomicrographe exceptionnel, très bien équipé, et de toute confiance.Visitez son site et vous verrez des exemples incroyables de créatures du micro-monde.

Il a accepté d’ illustrer l’effet que pouvait donner le Contraste Interférentiel (DIC) appliqué à l’humble et modeste pelure d’oignon.

Mis à part ces derniers exemples , il n’y a sur le web qu’une seule très petite image de pelure d’Oignon prise avec le DIC.

Paul James

 << Walter, vous avez raison quand vous dites que c’ est un des premiers objets que la plupart des microscopistes ont examiné.Je me rappelle très bien il y a de nombreuses années ,avoir regardé des pelures d’oignon en espérant voir un noyau vivre en direct « 

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ÉPISCOPIE ÉCONOMIQUE : Un miroir de Lieberkühn bon marché !

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Tout amoureux de microscopie à la recherche de sujets divers et variés, s’est un jour trouvé confronté à l’observation d’objets opaques sous l’objectif de son microscope.

 L’exemple le plus classique se trouve dans le monde des insectes, leur préparation pour une observation en transparence fait appel à des techniques longues et délicates à base de produits chimiques pas très sympathiques dans lesquels le sujet se doit de séjourner de longues journées selon son gabarit. Certains autres sujets ne peuvent pas être modifiés comme une pièce de monnaie par exemple et enfin d’autres sont plus ou moins altérés par la préparation microscopique.

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LA FLÈCHE DE MATHIAS

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L’éclairage oblique dans ses nombreuses variantes est l’une des techniques les plus utiles qui peuvent être employées par l’amateur (et le professionnel) pour examiner ses sujets microscopiques.
J’inclus dans le concept tout les dispositifs qui emploient la lumière qui passe autour des bords de quelques types d’obturateurs opaques, qui incluent les disques opaques pour champ noir, le classique trou clair dans la périphérie d’un disque opaque, l’éclairage oblique marginal (contraste de phase fait maison selon Sterrenburg) les filtres de Rheinberg, et les diaphragmes d’Illumination Circulaire Oblique raffinés ( désignés par ce sigle COL en Anglais) de Paul James.

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Traiter ses photos avec IRIS Méthode C-COOL

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   Beaucoup d’entre nous pratiquent la photomicrographie, que ce soit à l’aide d’un appareil photo numérique (APN), ou d’une Webcam Beaucoup aussi utilisent un logiciel spécifique de capture, qui peut être, par exemple Vega, ou Iris, ces deux logiciels étant mis gratuitement à notre disposition par leurs auteurs.

                       La plupart d’entre nous ont passé, ou bien passent beaucoup de temps à fignoler leurs réglages et leurs préparations, pour en tirer la plus grande qualité possible .Et combien parmi nous, contemplant le résultat de tous ces efforts , ressentent une pointe de déception leur titiller l’estomac, parce que cette image, si belle dans les oculaires, devient presque quelconque sur l’écran ou le papier, toute plate qu’elle est, avec ses couleurs qui ne sont pas tout à fait ce que l’on voyait ?

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AUX FRONTIÈRES DE LA MACROPHOTO.

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On a tous eu le problème ! L’objet à observer est trop  » gros  » pour être confortablement examiné ou photographié, car il dépasse le champ couvert par l’objectif faible dont nous disposons ( en général
3,5x ou 4x ). D’autre part le moyen employé pour réaliser la photographie ( en particulier la webcam qui
a un champ très restreint par rapport à la vue oculaire ) contribue à accentuer cet inconvénient…

Et cependant, il y a beaucoup de  » gros  » sujets très petits (!) : larves aquatiques, algues, oeufs ,etc., qui méritent d’être observés, avec une technique propre à montrer des détails invisibles à l’œil nu, mais qui se
situent à la limite inférieure du microscope, si l’on peut dire !

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MICROMESURES

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Le problème de la mesure des objets observés est important, et bien sûr, un jour ou l’autre on y est
confronté ! Je pense être utile en vous présentant la façon dont j’ai résolu le problème. Bien que ma  façon de procéder soit adaptée à mon matériel, elle peut donner naissance à des interprétations différentes et être source d’ adaptations personnalisées.
Au départ, je disposais d’un micromètre oculaire, mais il me fallait un micromètre objectif. J’ai donc résolu de le fabriquer…Evidemment, comme je me débrouillais  en labo photo, c’est vers cette solution que je me suis dirigé ! J’ai simplement photographié en macro sur une émulsion négative noir et blanc lente
(32 ISO), un simple réglet de 20cm. j’ai fait de nombreux essais très  précis pour que l’image de ce réglet
mesure très exactement 2cm sur le négatif, soit une réduction de 1/10ème.J’ai ensuite découpé le négatif pour ne conserver que l’image, que j’ai ensuite monté sur une lame, comme une préparation ordinaire, dans la coumarone! Voici l’ objet :

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SYSTÈME MICROFLASH : Arrêt sur image !

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Je pense que rien qu’à regarder cette photo, vous aurez compris le système …
Je précise qu’il a été mis au point pour la
 photographie des sujets vivants et donc mobiles sans avoir besoin de les  » fixer  » par des instillations sous lamelle de produits finalement létaux…hélas ! Je précise également qu’il était ( et est toujours pour moi ! ) destiné à la photographie  » argentique « ,
pas encore morte, Dieu merci !

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ECLAIRAGE DE MICROSCOPE PAR LED :

Ledblanche

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Toutes les WebCams, pour être adaptées sur un microscope, doivent avoir leur objectif d’origine retiré. Un adaptateur se vissant en lieu et place de l’objectif est la solution la plus fiable. A cause de la sensibilité spectrale de leur capteur (CCD ou CMOS), les WebCams sont très sensibles aux infrarouges et sont donc toutes équipées d’un filtre. Ce filtre est habituellement soit intégré à l’objectif, soit collé sur un support devant le capteur (attention, ne pas confondre la vitre du capteur CCD et le filtre, ne touchez jamais au CCD). En général, ces filtres sont de piètre qualité, et doivent être retirés pour garder une bonne résolution d’image.

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UNE POLARISATION ECONOMIQUE

Polarisationeco

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Vous avez vu de magnifiques effets obtenus avec un filtre polarisant et vous vous dites que ce doit être compliqué d’obtenir la même chose. C’est en fait très facile : n’importe quel microscope même bas de gamme permet d’obtenir ces couleurs chatoyantes.

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MICROSCOPIE QUANTITATIVE ( … enfin presque !)

Quantitative

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Tout microscopiste amateur (ou non !) s’est un jour posé la question de connaître la taille de ce qu’il observe . Pour un microscope le grossissement total est donné par le produit du grossissement de l’objectif par celui de l’oculaire. C’est très bien en théorie , mais qu’advient-il après l’adaptation plus ou moins sophistiquée d’une caméra sur le tube du microscope ?.

  • Mots-clé : Micromètre
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UTILISATION D' UNE CAMERA EN MODE IMAGE PAR IMAGE.

Imageparimage

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Bien que de nombreux amateurs de microscopie utilisent des Caméras Web par le port USB (et numérisent donc directement l’image), il existe d’autres sources d’images vidéo analogiques utilisant des caméras CCD, Cmos voire des camescopes.

Ayant démarré la prise de vue microscopique quelques années auparavant, à un moment où la qualité des Caméras Web n’avait rien de comparable, j’avais opté pour une autre approche.

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EPISCOPIE A TRAVERS L' OBJECTIF PAR FIBRE OPTIQUE

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Dans de nombreux cas, un éclairage par transparence s’avère impossible (objets opaques). Dans ce cas, il faut absolument éclairer le sujet par le dessus. Ceci est assez délicat compte tenu du faible espace entre l’objectif et le sujet lui-même. De plus, il faut que le faisceau lumineux reste bien en place et soit suffisamment concentré.

Un éclairage de ce type peut se trouver très facilement grâce à de nouvelles fibres optiques très bon marché (moins de 10 euros), et nos fameuses Leds blanches qui s’adapteront facilement à la faible taille de ces fibres optiques.

L’idée la plus simple est d’éclairer directement le sujet par le circuit tube oculaire – objectif.

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SUPPORT DE WebCam TRES ECONOMIQUE.

Support

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Actuellement, l’offre en appareils photographiques numériques se diversifie, avec des équipements de plus en plus performants. Mais pratiquement aucun d’entre eux ne peut être monté sur un microscope, d’autre part, il existe des équipements spécifiques, mais extrêmement coûteux.
                Nous avons résolu ce problème en adaptant une WEB CAM sur un tube photographique droit  de microscope, l’investissement est fort limité (quelques centaines de francs), l’adaptation et la mise au point demandent moins de deux heures de travail.
Notre choix s’est porté sur une caméra de marque Philips et de type Vesta Pro.

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